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　　細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時(shí)根據培養細胞的類(lèi)型、所需培養體積及不同的實(shí)驗目的而定。

　　(1)平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養板。懸浮型細胞的培養一般用V型。

　　U型培養板亦多用于培養懸浮型細胞 。V型培養板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類(lèi)型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時(shí)﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實(shí)驗時(shí)﹐無(wú)論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當做兩種不同淋巴細胞混合培養時(shí)﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會(huì )由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內。V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實(shí)驗時(shí)﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞后﹐低速離心)如果是養細胞的話(huà)，通常是選用平底的， 另外要特別注意材質(zhì)， 標示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養細胞用的。

　　圓底的好像沒(méi)聽(tīng)說(shuō)過(guò)拿來(lái)養細胞。 圓底的通常是拿來(lái)做分析， 化學(xué)反應， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了。

　　(2)細胞培養常見(jiàn)問(wèn)題與解答

　　問(wèn)：我看到培養板有4、6、12、24、48、96孔幾種規格 ，但不知道到底什么實(shí)驗用哪種規格。

　　答：要根據你具體的實(shí)驗要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細胞爬片一般用24孔等，要具體根據你實(shí)驗來(lái)定。

　　問(wèn)：請問(wèn)哪位高手知道Terasaki板是什么培養板，與普通細胞培養板有什么區別?

　　答：Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究，產(chǎn)品設計便于對晶體的觀(guān)察與結構分析。有兩種sitting 和handing drop兩種方法，兩種方法應用產(chǎn)品的外形結構也不同。材料上選擇crystal class polymer ，特殊的材料有利觀(guān)察晶體結構。

　　細胞培養板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細胞貼壁生長(cháng)與伸展。當然還有浮游細胞的生長(cháng)材料，同時(shí)還有low binding surface，有關(guān)更多實(shí)驗材料上的應用與對材料的選擇。

　　問(wèn)：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養板行嗎?請問(wèn)酶標板 多孔細胞培養板有什么區別?

　　答：用多空細胞培養板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區別：酶標板一般要比細胞培養板貴，細胞板主要做細胞培養，但也可以用來(lái)測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板，一般不能用做細胞培養，它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。常用不同培養板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結合不同孔的底面積就可算出各培養孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì )影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實(shí)驗的目的不同靈活掌握。

　　(3)細胞培養板的密閉和污染問(wèn)題

　　細胞培養板的加樣和操作：細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則，各項操作要保證規范、科學(xué)，不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。

　　問(wèn)：96，24孔培養板或培養皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會(huì )不會(huì )也隨著(zhù)溜進(jìn)去呢?

　　答：1.蓋子很松，屬于半開(kāi)放培養，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養皿外的co2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值)。

　　2.凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì )使培養皿內的液體蒸發(fā)，這對于定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養箱內空氣必須清潔(定期紫外線(xiàn)照，酒精擦洗，盡量少開(kāi)關(guān)培養箱)b培養箱內的濕度必須始終保持為100%(培養箱內放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養皿，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì )污染。主要是因為蓋子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著(zhù)有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無(wú)法通過(guò)產(chǎn)生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過(guò)空氣的擴散，不會(huì )產(chǎn)生氣流，所以只會(huì )透氣不會(huì )透菌。

　　我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內)，而其它孔中還有細胞要培養.我很擔心這樣會(huì )污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

　　使用前綜合考慮一下，充分使用所以的孔;如果只需要使用少數的孔可以只用一邊的，其余用蓋子蓋住，我習慣于先用右側的孔(右手加樣方便)。

　　其實(shí)自己感覺(jué)只要注意無(wú)菌操作，一般是不會(huì )污染的。操作時(shí)用幾塊玻片把板子一側墊高，不要把蓋子全打開(kāi)，一般沒(méi)問(wèn)題。

　　(4)細胞分布不均及解決辦法

　　問(wèn)：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問(wèn)題啊?

　　答：請問(wèn)你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是后者，而且是轉圈搖勻的話(huà)，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對會(huì )多一點(diǎn)，但是中間的數量也不會(huì )很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒(méi)有特異去振蕩培養板。

　　大概是板子的質(zhì)量問(wèn)題吧或者是不是鋪板時(shí)候的細胞密度太低了?我用的corning的板 。

　　一個(gè)好辦法：在你培養種板之前，把培養板放入培養箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養板孔的側面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養的細胞基本是均勻生長(cháng)。記住千萬(wàn)不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會(huì )想你說(shuō)得那樣聚積在一起。

　　我今天把培養板放入培養箱里幾個(gè)小時(shí)，適當的把細胞密度加大了一下，另外多加了一點(diǎn)培養液，今晚看細胞鋪的挺好的。我認為有兩種可能解決你問(wèn)題的辦法:1.加入前吹打均勻;2.從多孔板側邊或底邊緩慢加入。

　　問(wèn)：我在做原代培養時(shí)也遇到過(guò)這種情況，我一直以為培養皿鋪膠不均勻會(huì )導致這種現象，因為混勻的血管段加入到培養皿中時(shí)，在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養皿中，24h后貼壁的血管段就是周邊多，中間相對少些。下次我要試試hkqu戰友的方法看能否改變這種現象。

　　答：這種現象很正常呀，不知你仔細觀(guān)察過(guò)沒(méi)有，孔直徑愈小，這個(gè)現象越明顯，我試過(guò)，24、96孔板這種現象不可避免，因為液體的附壁使得孔內培養液不是成一個(gè)液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預等原因而不能加足量培養液，使得細胞隨培養液一起出現“邊集”現象，如果為了使孔中央也有均勻細胞而增加接種細胞數量的話(huà)，這要看你需要觀(guān)察何種指標，如果是MTT ，免疫組化的話(huà)會(huì )因為細胞成層而影響結果。

　　(5)6孔板接種和換液?jiǎn)?wèn)題：

　　問(wèn)：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個(gè)孔(隨機)細胞長(cháng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液，培養基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久，很容易細胞就會(huì )凍死了。建議你把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。

　　另外，跟你細胞的生長(cháng)狀態(tài)也有關(guān)。加藥之前的細胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養。保證細胞狀態(tài)良好。

　　或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養板本身的問(wèn)題，你再換換其它培養板試試看。再有可能就是細胞狀態(tài)問(wèn)題了，種板時(shí)的血清濃度調高試一下

　　問(wèn)：近幾天，我用六孔培養板接種細胞，培養24小時(shí)后更換培養基，在更換培養基之前，顯微鏡觀(guān)察到細胞貼壁，狀態(tài)非常的好，更換了培養基后，立即用顯微鏡觀(guān)察，發(fā)現每個(gè)孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態(tài)。細胞變得非常小，產(chǎn)生大量的碎片，而另一半的細胞一切正常，異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺，上半個(gè)圓是好的，下半個(gè)圓就不好，這是怎么一回事?

　　答：你可以看一下是不是培養板沒(méi)放水平。有一回我也出現過(guò)這種情況。

　　你的培養液如何，如果培養液過(guò)期，細胞就不會(huì )貼壁。換一點(diǎn)新配制的培養液試一試。

　　我也經(jīng)常碰到，我想可能是板的問(wèn)題，換一個(gè)牌子的板或換用培養瓶就沒(méi)問(wèn)題了。

　　不知樓主所需換液的培養板多不多，換培養基的時(shí)候如果沒(méi)有注意風(fēng)機的影響，特別是所需換液的培養板很多時(shí)，容易使細胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此，換液時(shí)應該逐個(gè)培養板進(jìn)行，別怕浪費吸管，注意操作的效率!

　　(6)24孔板接種問(wèn)題：

　　問(wèn)：把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(cháng)不滿(mǎn)，每天換液時(shí)都用PBS 清洗，第二天換液時(shí)都出現同樣的情況，每孔的邊緣長(cháng)的很好，中央大量死細胞?

　　答：我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類(lèi)有關(guān)或者和培養液有關(guān)?

　　應該是培養液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養板的邊緣液體會(huì )向上走，造成培養液面呈現一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的低處，培養液少，細胞的營(yíng)養不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì )造成損傷，即使有增值過(guò)來(lái)的細胞也會(huì )死掉。

　　個(gè)人經(jīng)驗認為這是物理問(wèn)題:24孔板小，細胞接種進(jìn)去后是很難搖均勻的，結果導致細胞重貼壁后呈現四周密中間稀的狀況.至于中間較多死細胞，如果是懸浮狀的話(huà)，也一樣是物理問(wèn)題。接種后比較粗暴的碰撞，似乎對搖均勻細胞有一定效果.

　　同時(shí)你所說(shuō)的細胞周?chē)芏虚g稀疏，大約有如下原因：

　　1.培養液加得太少。主要是由于液體張力的問(wèn)題。

　　2.細胞接種后震蕩太厲害了。由于離心力作用導致細胞分布到周?chē)?/p>

　　細胞分布均勻與否有一點(diǎn)很關(guān)鍵，即每種細胞是有個(gè)體差異的，別人的細胞操作不一定適合于你.所以要靠自己摸索，且找出專(zhuān)屬于自己細胞的一套規律，有如下經(jīng)驗：

　　1.所有待接種的細胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。

　　2.按資料記載，24孔板的液體量為1ml，個(gè)人也覺(jué)得1ml的量足矣。

　　3.接種時(shí)，要慢慢加樣，且記得輕微旋轉槍頭，這樣做對細胞均勻分布有一定效果。

　　4.接種后直接放入培養箱讓細胞適應培養板這個(gè)新的環(huán)境，個(gè)人認為沒(méi)有必要在室溫放置一段時(shí)間。

       注：僅供參考！