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　　本生生物帶您了解ELISA試劑盒實(shí)驗重要的步驟

　　elisa試劑盒是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實(shí)驗診斷方法。雖然elisa試劑盒的操作步驟看似簡(jiǎn)單，但沒(méi)做到位的話(huà)就會(huì )影響實(shí)驗的效果。所以elisa試劑盒實(shí)驗時(shí)至關(guān)重要的步驟有：

　　一、重要的洗滌

　　不充分的洗滌會(huì )導致差異和高背景，從而帶來(lái)不理想的實(shí)驗結果。如果未結合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì )增加背景噪音。有必要的話(huà)，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì )阻止非特異結合反應。如果背景過(guò)高，懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數。

　　二、關(guān)鍵的封閉

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會(huì )。如果背景過(guò)高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長(cháng)封閉時(shí)間。

　　目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

　　三、抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結合會(huì )增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。

　　四、檢測試劑要適量

　　切勿使用過(guò)多的檢測試劑。如果濃度過(guò)高，或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì )導致高背景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應加入終d止液。

　　只有確保每一步操作都做到位，才會(huì )呈現完美的實(shí)驗結果。所以elisa實(shí)驗的每一步都很重要，不可以掉以輕心。