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血清使用和處理中的常見(jiàn)問(wèn)題
更新時(shí)間:2021-10-22瀏覽:2218次

  血清使用和處理中的常見(jiàn)問(wèn)題


  1.保存血清方法

  建議血清應保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。一次無(wú)法用完一瓶,建議您無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

  2.如何解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品品質(zhì)受損

  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。

  3.血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該如何處理

  血清中沉淀物的出現有許多種原因,但原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì )存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的品質(zhì)。

  欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。

  4.為什么要熱滅活血清

  加熱可以滅活補體系統。啟動(dòng)的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,啟動(dòng)淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養ES細胞,昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

  5.有必要做熱滅活嗎

  實(shí)驗顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的品質(zhì),而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察,如同“小黑點(diǎn)",常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì )使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此,除非必須,盡可能不需要做熱處理這一步。

  6.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀

  儲存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的品質(zhì)。建議在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。

  7.如何避免沉淀物的產(chǎn)生

  解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì )變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害,而影響血清的品質(zhì)。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )造成沉淀物的增多。

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