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　　天津本生帶您了解細胞凍存的具體步驟!

　　細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，以便長(cháng)期儲存的一種技術(shù)。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。下面看下BUNSEN本生小編的詳解：

　　1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液;

　　2、取對數生長(cháng)期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。

　　3、去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養皿表面)把單層生長(cháng)的細胞消化下來(lái);

　　4、離心1000rpm，5min;

　　5、去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml;

　　6、將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml;

　　7、在細胞凍存管上標明細胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間及操作者;

　　8、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

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