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本生揭秘：多孔細胞培養板的密閉和污染問(wèn)題
多孔細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則，各項操作要保證規范、科學(xué)，不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。
多孔細胞培養板的加樣和操作：
細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則，各項操作要保證規范、科學(xué)，不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。
問(wèn)：
96，24孔培養板或培養皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會(huì )不會(huì )也隨著(zhù)溜進(jìn)去呢?
答：
蓋子很松，屬于半開(kāi)放培養，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養皿外的CO2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值)。
凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì )使培養皿內的液體蒸發(fā)，這對于精確定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養箱內空氣必須清潔(定期紫外線(xiàn)照，酒精擦洗，盡量少開(kāi)關(guān)培養箱)b培養箱內的濕度必須始終保持為100%(培養箱內放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。
就好像培養皿，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì )污染。主要是因為蓋子“L"型邊緣產(chǎn)生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著(zhù)有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無(wú)法通過(guò)產(chǎn)生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過(guò)空氣的擴散，不會(huì )產(chǎn)生氣流，所以只會(huì )透氣不會(huì )透菌。
問(wèn)：
使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內)，而其他孔中還有細胞要培養.我很擔心這樣會(huì )污染，不知道要注意什么?
答：
在超凈臺內如果操作規范的話(huà)應該可以的，我想你可以充分利用培養版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其他孔用蓋子蓋起來(lái)。
使用前綜合考慮一下，充分使用所有的孔;如果只需要使用少數的孔可以只用一邊的，其余用蓋子蓋住，我習慣于先用右側的孔(右手加樣方便)。
操作時(shí)用幾塊玻片把板子一側墊高，不要把蓋子全打開(kāi)，一般沒(méi)問(wèn)題。
細胞分布不均及解決辦法
問(wèn)：
細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?
答：
請問(wèn)你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是后者，而且是轉圈搖勻的話(huà)，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多!
這里提供一個(gè)好辦法：在培養種板之前，把培養板放入培養箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養板孔的側面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養的細胞基本是均勻生長(cháng)。記住千萬(wàn)不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會(huì )想你說(shuō)得那樣聚積在一起。
培養板孔直徑愈小，這個(gè)現象越明顯，24、96孔板這種現象不可避免，因為液體的附壁使得孔內培養液不是成一個(gè)液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預等原因而不能加足量培養液，使得細胞隨培養液一起出現“邊集"現象，如果為了使孔中央也有均勻細胞而增加接種細胞數量的話(huà)，這要看你需要觀(guān)察何種指標，如果是MTT，免疫組化的話(huà)會(huì )因為細胞成層而影響結果。
消化細胞時(shí)要注意吹打均勻，避免細胞成團，而且孔內培養液量要足夠，一般接種時(shí)加足量培養液，加干預時(shí)換一次液，干預液加培養液量等于接種時(shí)培養液量，這樣的話(huà)“邊集"現象會(huì )有所改觀(guān)，不妨一試。
問(wèn)：
我做的是空斑形成實(shí)驗，最好是細胞鋪成均勻的一層，，可接種病毒時(shí)大部分孔都還好，個(gè)別的不太均勻。細胞組內差異很大，想請教一下大家加細胞的時(shí)候都有什么方法呀?
答：
細胞消化后吹打成單細胞懸液很關(guān)鍵!保證分板時(shí)每個(gè)孔的細胞數目是一致的!
當然還有處理因素各個(gè)孔之間的平行也很重要，比如說(shuō)加藥時(shí)，藥物稀釋后混勻，保證每個(gè)孔的濃度是一致的!
再者加細胞和藥物時(shí)，要試驗組和對照組一塊輪流加，避免加樣先后順序導致細胞密度和藥物濃度的差異!
問(wèn)：
吹打已經(jīng)是均勻了，但是鋪板，6孔，24孔總有些不均勻，有點(diǎn)往中間集中。而且明明計數好了鋪，長(cháng)一兩天，各個(gè)孔密度又不一樣，對檢測有影響，有良策嗎?
答：
如果用巴氏吸管鋪的話(huà)，每次吸取的量不要太多，因為吸管內的細胞會(huì )自動(dòng)向下沉，往往第一開(kāi)始幾個(gè)孔細胞數多，經(jīng)常均勻細胞懸液，加液走S型路線(xiàn)。
如果用移液器的話(huà)，tips要處理下，把去掉避免損傷細胞，這樣每一次取液對應一個(gè)孔。用tip一對一孔加入比較準確。但也要注意混勻懸液。
設立平行組，n要足夠大(可以計算一下)。
鋪板后不要搖，因為搖動(dòng)會(huì )導致細胞向中間聚集。最好鋪板一次搞定。
多孔細胞培養板 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。
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