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本生資訊| 對于血清知識點(diǎn),圍觀(guān)的看過(guò)來(lái)!
由于血清來(lái)源于動(dòng)物,且含有細胞培養中所需要的各種營(yíng)養(血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(cháng)因子、激素、無(wú)機物等),這奠定了血清是細胞培養實(shí)驗中普遍的試劑的基礎。
目前血清的采集地主要分布在以下國家:
市面上的牛血清產(chǎn)品名稱(chēng)雖然對較多,但根據其不同的特性,大致可以分為以下四種。根據牛的取血年齡可以區分:
胎牛血清
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱(chēng)FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹心臟穿刺采血得來(lái)的血清。
國產(chǎn)胎牛血清
國產(chǎn)胎牛血清(并無(wú)明確定義,但通常用此命名)指的是出生4-6小時(shí),且未進(jìn)行哺乳(unsuckled)進(jìn)食的新生牛,有時(shí)還稱(chēng)作國產(chǎn)新生牛血清。
新生牛血清
新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡(jiǎn)稱(chēng)NBCS,或稱(chēng)小牛血清)指的是出生14天-3個(gè)月進(jìn)行取血的牛血清。
成年牛血清
成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡(jiǎn)稱(chēng)ABS)指的是取血時(shí)牛齡通常超過(guò)12個(gè)月的牛血清。
以上取血牛齡的差異主要是受當地國家畜牧業(yè)的發(fā)展及法規限制影響,因為牛血多為畜牧業(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專(zhuān)門(mén)為取血而養的牛。
幾種血清的比較:
這幾種不同牛齡血清所含的促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規來(lái)說(shuō),年齡越小的牛血清,細胞培養效果越好。
胎牛血清培養效果好于新生牛,且因為胎牛未進(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG含量低。故目前多數實(shí)驗人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行細胞培養。
胎牛血清成分已知的有上千多種,以下為主要成分表:
以下是BUNSEN本生技術(shù)小編為您總結的血清相關(guān)的知識點(diǎn):
1、血清的顏色如何?
為何有的胎牛血清顏色偏紅,而有的偏黃?是因為胎牛血清顏色是由血紅蛋白(鮮紅)和膽紅素(黃)決定的,主要是受血紅蛋白影響。
血紅蛋白含量很低時(shí),含少量膽紅素,呈淡黃或金黃。血紅蛋白含量高時(shí),會(huì )呈現淡紅色。
需要長(cháng)期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱(未開(kāi)封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請勿超過(guò)1個(gè)月,若一次無(wú)法用完一瓶,建議將血清無(wú)菌分裝并冷凍。
2、血清如何解凍?
血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷
輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉入37℃解凍,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結并出現沉淀。
3、使用前是否需要過(guò)濾?
本公司血清在ISO 13485認證的廠(chǎng)房中生產(chǎn),經(jīng)過(guò)3次0.1 μm過(guò)濾,出廠(chǎng)經(jīng)過(guò)檢測并且會(huì )使用三種以上的細胞株進(jìn)行培養測試及無(wú)菌檢測,污染幾率非常非常非常低(重要的事情說(shuō)三遍)。通常細胞污染有非常多的可能性,根據協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測,結果表明絕大部分都是因人為操作失誤導致污染。因此買(mǎi)來(lái)的血清不需要再次進(jìn)行過(guò)濾。
4、為什么血清中會(huì )有沉淀生成,主要成分是什么,會(huì )對實(shí)驗有什么影響?
血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),胎球蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻連蛋白,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀),膽固醇等。
原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復凍融,長(cháng)期儲存于2-8℃或者室溫。
預防:非必要,不用熱滅活;避免反復凍融;-20℃保存;4℃全融(期間間斷搖晃均勻);2000 rpm離心5分鐘(不建議用0.2 μm濾膜過(guò)濾),取上清使用。
5、黑膠蟲(chóng)是來(lái)源于血清嗎?
目前科學(xué)界對黑膠蟲(chóng)的身份并無(wú)定論, 通常是顯微鏡下觀(guān)察到密密麻麻的小黑點(diǎn)在培養基中自主游動(dòng),就稱(chēng)為黑膠蟲(chóng)污染。
黑膠蟲(chóng)在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等,可引起細胞生長(cháng)遲緩或裂解凋亡。
目前沒(méi)有充分的數據表明黑膠蟲(chóng)來(lái)源于血清,因為其尺寸遠大于血清過(guò)濾時(shí)所用的0.1微米(μm)濾膜。建議各位老師通過(guò)使用三抗(Cat#: C3422-0100)外加支原體處理試劑(Cat#: 03-038-1B)嘗試殺滅黑膠蟲(chóng)。
6、血清存在批間差嗎?
答案是毋庸置疑的,因為血清來(lái)源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,且血清組成及含量常隨供血動(dòng)物的性別、年齡、生理條件和營(yíng)養
條件不同而異。每個(gè)批號的組分和百分比含量都是不固定的,所以批間差異是存在的。
建議*行批號測試,篩選出合適批號,購買(mǎi)半年甚至一年以上的用量,避免批間差造成實(shí)驗波動(dòng)(胎牛血清在-20℃保存可達5年)。
Tips:
1、如果要除去血清中的沉淀,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管中,400g 離心,留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞,因此不建議用過(guò)濾的方法。
2、沉淀不是檢驗血清的硬指標,但為了實(shí)驗準確、實(shí)驗美觀(guān)、實(shí)驗便利,還是應該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法,再加上一款品質(zhì)穩定的優(yōu)秀血清,對于細胞實(shí)驗來(lái)說(shuō),至關(guān)重要。
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