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　　豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒技術(shù)說(shuō)明

　　檢測范圍：0.6μg/ml -22μg/ml

　　96T

　　使用目的： 豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒用于測定豬全血樣本中游離血紅蛋白(F-Hb)含量。

　　實(shí)驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬游離血紅蛋白(F-Hb)水平。用純化的豬游離血 紅蛋白(F-Hb)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入游離血紅蛋白 (F-Hb)，再與 HRP 標記的游離血紅蛋白(F-Hb)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物， 經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離血紅蛋白(F-Hb)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中豬游離血紅蛋白(F-Hb)濃度。

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

   

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　豬游離血紅蛋白操作程序總結：

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的 OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定，計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個(gè)月

　　豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。