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實(shí)驗操作:小鼠ELISA試劑盒中溫育是放在哪溫育呢?
更新時(shí)間:2023-06-07瀏覽:834次

  實(shí)驗操作:小鼠ELISA試劑盒中溫育是放在哪溫育呢?


  小鼠ELISA試劑盒的操作要點(diǎn)

  ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。國內醫學(xué)檢驗一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說(shuō)明,嚴格遵照規定操作,必能得出準確的結果。

  本生小鼠ELISA試劑盒操作步驟:

  方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

  1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽(yáng)性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀(guān)察結果:小鼠ELISA試劑盒反應孔內顏色越深,陽(yáng)性程度越強,陰性反應為無(wú)色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

  方法二 用于檢測未知抗體的間接法:

  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

  洗滌

  洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應步驟,小鼠ELISA試劑盒但卻也決定著(zhù)實(shí)驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來(lái)達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì),以及在反應過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

  小鼠ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng),是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng )美好的未來(lái)。

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