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　　ELISA檢測試劑盒如何避免假陽(yáng)性現象及實(shí)驗關(guān)鍵點(diǎn)

　　1、加樣

　　對于間接進(jìn)口ELISA檢測試劑盒標本一般都要進(jìn)行稀釋?zhuān)绻訕硬粶示蜁?huì )造成誤差，尤其當稀釋倍數大時(shí)，很小的絕對誤差，會(huì )導致較大的相對誤差，使陰性(或弱陽(yáng)性)標本呈陽(yáng)性(或陰性)。加樣時(shí)應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統處理標本，可較好地避免以上誤差。

　　2、洗滌

　　在進(jìn)口ELISA檢測試劑盒中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關(guān)健一步，應引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來(lái)達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

　　3、 溫育

　　每種試劑都有其*合適的反應模式，其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時(shí)間長(cháng)，會(huì )造成整板本底高，陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā)，板上應加蓋。

　　4、酶標儀判讀

　　作為記錄測定結果的儀器，酶標儀的性能穩定與否，決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進(jìn)行保養，對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長(cháng)設置要正確，使用雙波長(cháng)，一個(gè)檢測波長(cháng)，一個(gè)參比波長(cháng)，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標儀讀數時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說(shuō)明書(shū)

　　由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標準化，盡管目前國際上以及我國有了部分標準血清或參比血清(血清盤(pán))。但由于受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制，在酶聯(lián)吸附測定中有時(shí)不可避免的會(huì )出現一定的非特異性，但我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至限底，從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實(shí)驗結果。

　　ELISA實(shí)驗的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記，其中，結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。進(jìn)行檢測時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結合。通過(guò)洗板除去非結合物，再加入酶標記的抗原或抗體，此時(shí)，能固定下來(lái)的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過(guò)加入與酶反應的底物后顯色，根據顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的靈敏度。

　　那么ELISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些?

　　1.在儲存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致呈現錯誤的結果。

　　2.小心汲取試劑并嚴格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請注意在汲取標本/規范品，酶結合物或底物時(shí)，di一個(gè)孔與一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大，將會(huì )導致不同的 “預孵育"時(shí)刻，然后明顯地影響到測量值的準確性及重復性。

　　3.試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。

　　4.濃洗滌液會(huì )有鹽分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

　　5.剛敞開(kāi)的酶聯(lián)板孔中可能會(huì )含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F象，不會(huì )對試驗結果造成任何影響。

　　6.一切的樣品都應管理好，依照規則的程序處理樣品和檢測設備。

　　ELISA試劑盒 本生是實(shí)驗室本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。