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細胞培養小知識,你知道嗎?
更新時(shí)間:2023-10-12瀏覽:526次

  細胞培養小知識,你知道嗎?


  什么是細胞培養呢?

  細胞培養是指從動(dòng)物或植物中取出細胞,然后使其在合適的人工條件下生長(cháng)。這些細胞可于培養前直接從組織中取出來(lái)并采用酶或機械方法進(jìn)行解離,或者也可來(lái)自已經(jīng)建立的細胞系或細胞株。

  接下來(lái)我們一起跟隨BUNSEN本生了解一些細胞培養中的小技巧:

  1、冷凍管該如何解凍? 取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預防冷凍管爆裂。

  2、細胞冷凍管解凍培養時(shí),是否應馬上去除DMSO? 除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養基的培養角瓶中,待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無(wú)法生長(cháng)或貼附的問(wèn)題。




  3、可否使用與原先培養條件不同的培養基? 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基, 細胞大都無(wú)法立即適應,造成細胞無(wú)法存活。

  4、可否使用與原先培養條件不同的血清種類(lèi)? 不能。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源,所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。

  5、何謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,FCS乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS(calf serum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。

  6、培養細胞時(shí)應使用5%或10%CO2?或根本沒(méi)有影響? 一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時(shí)應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),細胞培養時(shí)應使用10%CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí),則應使用5%CO2培養細胞。

  7、何時(shí)須更換培養基? 視細胞生長(cháng)密度而定,或遵照細胞株基本數據上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養基即可。

  8、培養基中是否須添加抗生素? 除于特殊篩選系統中外,一般正常培養狀態(tài)下,培養基中不應添加任何抗生素。

  9、附著(zhù)性細胞繼代時(shí)所使用的trypsin-EDTA濃度?應如何處理? 一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于-20°C,避免反復冷凍解凍造成trypsin 的活性降低,并可減少污染的機會(huì )。

  10、懸浮性細胞應如何繼代處理? 一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時(shí),可將培養角瓶口端稍微抬高,直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶,加入新鮮培養基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。

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