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BUNSEN本生分享:熒光定量PCR耗材的選擇
PCR是分子生物學(xué)研究的基礎實(shí)驗,用于在短時(shí)間內將單拷貝的目標DNA序列擴增至數百萬(wàn)拷貝。除了選擇可靠的PCR儀外,用于PCR反應的塑料耗材除考慮兼容性,還要求避免存在污染物和抑制劑,同時(shí)又具有可保障最佳PCR效果的高質(zhì)量。因此,如何選擇作為用戶(hù),了解如何選擇PCR / qPCR耗材,顯得尤其重要。
第一步,選擇通量
根據樣品數量選擇通量,PCR耗材的最常見(jiàn)規格為:
管:0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL
96 孔板:0.2 mL, 0.1 mL
384 孔板:0.02 mL
單管
8聯(lián)管
96孔板
384孔板
第二步, 選擇加樣體積:不同類(lèi)型管,可供選擇的容量體積不同。
單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容,或稱(chēng)快速)
8聯(lián)管: 0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容,或稱(chēng)快速)
96 孔板:0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容,或稱(chēng)快速)
384 孔板:0.02 mL
“(低容)"意味著(zhù)高度更低。 低容耗材更短的設計程度減少了反應體系上方的空間,降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導效率,因此也被稱(chēng)為“快速"管或板。
第三步, 對于PCR板的選擇,需要進(jìn)一步根據實(shí)驗類(lèi)型和儀器選擇裙邊、切割角、顏色等。
3.1裙邊: 根據儀器加熱模塊類(lèi)型選擇
無(wú)裙邊:
兼容絕大多數PCR儀和實(shí)時(shí)PCR儀的模塊,易于剪裁,但不適用于自動(dòng)化應用。
半裙邊:
板的邊緣周?chē)哂卸痰倪吘?,加熱或移液過(guò)程中提供足夠的支撐,不宜變形彎曲
全裙邊:
有覆蓋板高度的邊緣,適用于自動(dòng)化操作
3.2顏色: 透明或白色
PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的顏色形式,以適用于不同類(lèi)型PCR反應。在實(shí)時(shí)PCR的反應時(shí),與透明耗材相比,我們更推薦使用白色塑料耗材,以實(shí)現靈敏和準確的熒光檢測。
白色耗材通過(guò)阻止熒光折射出管來(lái)提高qPCR數據的靈敏度和一致性。折射被最小化時(shí),更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比(圖B)。此外,白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號,從而使重復實(shí)驗中的差異降至低。在極少數情況下,如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強而過(guò)飽和,可以使用磨砂孔替代。
3.4 切角
切角是對PCR板的一個(gè)角缺失,取決于所需要適配的儀器。切角可能位于96孔板的H1,H12或A12位置,或384孔板的A24位置
3.5品牌選擇
市場(chǎng)上有許多品牌和廠(chǎng)家提供PCR耗材,選擇時(shí)需要考慮哪些因素呢? PCR耗材品質(zhì)由包括原料、無(wú)污染、一致性等決定。
1. 原料:Thermo Scientific選用優(yōu)質(zhì)的全新醫用級聚丙烯原料
2. 生產(chǎn)環(huán)節:十萬(wàn)級潔凈車(chē)間生產(chǎn),無(wú)RNase、DNase和外源DNA污染
3. 批間一致性:遵循嚴格的生產(chǎn)標準和檢測標準,由資深專(zhuān)家使用的設備進(jìn)行生產(chǎn),確
保批間一致性和可追溯性,確保用戶(hù)獲得可靠PCR實(shí)驗數據。
第四步,選擇正確的PCR膜
PCR板選好后,還需要選擇一張好的PCR膜來(lái)密封,才能保證獲得準確可靠的PCR數據,這對實(shí)時(shí)PCR尤其重要!
我們的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(貨號AB1170)產(chǎn)品采用壓力敏感密封設計。只有在施加壓力的情況下,這種非粘性粘合產(chǎn)品才可以粘合到孔的邊緣上。其只在需要粘合的位置產(chǎn)生良好的密封效果,使孔開(kāi)口位置變得超透明,實(shí)現的熒光信號傳輸。
強效壓敏粘附,可產(chǎn)生牢固的粘合效果,以盡量減少蒸發(fā),使每個(gè)樣本保持較高的PCR效率
其光學(xué)透明度可用于qPCR及其他熒光應用
一致的封口厚度和透明度,確保整塊板信號傳輸相等
可剝離,剝離后平板上無(wú)粘性殘留
膜兩端無(wú)粘性,輕松進(jìn)行密封和去除操作
適用溫度范圍:–80°C至110°C
PCR耗材 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng),是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng )美好的未來(lái)。
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