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本生闡述:ELISA方法如何檢測帶抗體的相關(guān)指標
在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱(chēng)為間接法,也是目前常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經(jīng)洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經(jīng)孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來(lái)說(shuō)即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經(jīng)孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結果可用目測或用分光光度計定量測定。
ELISA試劑盒操作步驟:
1. 將抗原按5μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100μl /孔,4℃過(guò)夜。
2. 次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
3. 加2%BSA封閉室溫1h,200μl /孔。
4. 陽(yáng)性對照從10ug/ml,做倍必稀釋?zhuān)郎y血清從1:50做倍比稀釋?zhuān)A試驗后確定稀釋倍數及陽(yáng)性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做標準曲線(xiàn)為參數),室溫1h。
5. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
6. 加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度)PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,100μl /孔,室溫1h。
7. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
8. 顯色,100μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數,可用ABTS,OPD,TMB等。
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng),是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng )美好的未來(lái)。
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