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本生闡述影響ELISA試劑盒靈敏度出現問(wèn)題及解決辦法
ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。BUNSEN本生技術(shù)小編詳解:將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結一下,以期給同行帶來(lái)—些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
1、超過(guò)有效期。試劑盒必須在有效期內使用,超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì )產(chǎn)生很弱的信號。
2、試劑盒沒(méi)有按規定進(jìn)行保存,受高溫影響。
3、試劑、樣品用前未平衡至室溫
4、加入試劑的體積和時(shí)間有誤,移液器計量不準,吸嘴內水分太多或不清潔。
5、洗板及加樣過(guò)程中,酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力,
6、孵育時(shí)間及孵育溫度未達到要求,反應板放入培養箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調整。
7、洗板次數過(guò)多,或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求,洗滌沖擊力太大,浸泡時(shí)間太長(cháng)等,
8、顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入。
9、底物作用時(shí)間不夠,
10、燕餾水水質(zhì)有問(wèn)題
ELISA試劑盒靈敏度出現問(wèn)題相應的解決方法
1、實(shí)驗前檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過(guò)期,
2、不要將試劑盒長(cháng)時(shí)間置于常溫下,按便用規定儲藏。
3、試劑、樣品用前平衡至室溫
4、確定所使用的試劑體積正確,加入時(shí)間適當。校正移液器,移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快,盡量排放完。
5、確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如愛(ài)氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗千凈,確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。
6、孵育溫度應控制在37-38C,孵育時(shí)間嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作。保溫期內不宜多開(kāi)門(mén),以免影響保溫。
7、嚴格按說(shuō)明書(shū)要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說(shuō)明書(shū)要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數,
8、顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過(guò)快,先加顯色劑A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合。
9、準確定時(shí)。
10、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響。
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